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熒光定量PCR儀器高精度實現核酸實時定量

發布時期:2026-02-05 10:24:54 作者: 農業氣象站  來源:超聲波氣象站   人氣:129

熒光定量PCR儀器是用于(yu)實時監測PCR擴增過程的高精度設備,單(dan)通(tong)道8孔設計。其通(tong)過結(jie)合(he)PCR擴增與熒(ying)光檢測技術,實現核酸靶標(biao)的快速精準定量分析,服(fu)務(wu)于(yu)分子診斷、病原體(ti)檢測、基因表(biao)達分析及(ji)生命科學研(yan)究等(deng)領域。


熒光定量PCR儀器是一種(zhong)用(yong)于實(shi)時監測(ce)聚合酶鏈式反應(PCR)過(guo)程(cheng)(cheng)的(de)(de)高精度分析(xi)(xi)設備。它的(de)(de)核心功能在(zai)于,通過(guo)在(zai)PCR擴增反應體系(xi)中加入(ru)熒光(guang)基團,并利用(yong)光(guang)學系(xi)統對(dui)(dui)反應管內的(de)(de)熒光(guang)信號(hao)進(jin)行實(shi)時采集,從而實(shi)現(xian)對(dui)(dui)目標核酸(suan)片段(DNA或cDNA)的(de)(de)定(ding)量(liang)與定(ding)性(xing)分析(xi)(xi)。這一技(ji)術將傳統的(de)(de)終點PCR檢(jian)測(ce),升級為可(ke)觀測(ce)整個擴增進(jin)程(cheng)(cheng)的(de)(de)動態(tai)定(ding)量(liang)分析(xi)(xi)。


該儀(yi)器(qi)的(de)基(ji)本原理是,在PCR循(xun)環的(de)每個延(yan)伸步驟(zou)結束后,檢測(ce)與擴增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)特(te)異性(xing)結合的(de)熒光染(ran)料的(de)信號強(qiang)度。隨(sui)著(zhu)目標核酸片段以指數(shu)方(fang)式擴增(zeng)(zeng),熒光信號也相(xiang)應增(zeng)(zeng)強(qiang)。儀(yi)器(qi)內(nei)置的(de)軟件實時繪制出熒光強(qiang)度隨(sui)循(xun)環數(shu)變化的(de)擴增(zeng)(zeng)曲線(xian)(xian)。通過對曲線(xian)(xian)的(de)分析,特(te)別是循(xun)環閾值(Ct值)的(de)確定,可(ke)以精確計算(suan)出反應起始(shi)時模板核酸的(de)初始(shi)濃度,實現絕對定量(liang)或(huo)相(xiang)對定量(liang)。


以(yi)單通(tong)(tong)道(dao)8孔(kong)機型為例,這類(lei)儀器結構緊湊,適(shi)用于樣(yang)本量(liang)適(shi)中的(de)實驗室。其關鍵性(xing)能(neng)特點包括精確(que)的(de)溫度(du)控制系統。PCR反應對溫度(du)變化的(de)敏感性(xing)極高,儀器需要確(que)保樣(yang)品孔(kong)間以(yi)及孔(kong)內溫度(du)的(de)均勻性(xing)與準確(que)性(xing),這是(shi)獲得可(ke)靠、可(ke)重復擴(kuo)增(zeng)結果(guo)的(de)基礎。此外(wai),儀器通(tong)(tong)常配(pei)備高效的(de)光學檢(jian)測(ce)模塊,能(neng)夠(gou)靈敏地捕(bu)捉微弱的(de)熒(ying)光信號變化。配(pei)套的(de)數(shu)據管理軟(ruan)件則提供了從實驗設置(zhi)、數(shu)據采集、曲(qu)線(xian)分析到(dao)結果(guo)報告的(de)完整解決方案(an),部分軟(ruan)件支持(chi)多通(tong)(tong)道(dao)多重檢(jian)測(ce)的(de)數(shu)據解析。


在實際應用中,熒光定量PCR儀器的(de)用途十分(fen)(fen)廣泛(fan)。在(zai)分(fen)(fen)子(zi)診斷與臨(lin)床(chuang)檢測領域,它(ta)是病原體(如病毒、細菌)核酸檢測的(de)核心工具,用于(yu)傳染病診斷、載(zai)量監測,以及遺傳病基(ji)因突變篩查。在(zai)生(sheng)命科學研究中,科研人員利用它(ta)進(jin)行(xing)基(ji)因表達(da)差異分(fen)(fen)析(如比較(jiao)不同(tong)組織或(huo)處理條件(jian)下特定(ding)基(ji)因的(de)mRNA表達(da)水平)、microRNA研究、單(dan)核苷酸多態性(xing)(SNP)分(fen)(fen)型等(deng)。其定(ding)量能力使得研究從“是否存在(zai)”深入到“有多少”的(de)層面。


操作(zuo)時,用(yong)戶需將準備(bei)好的(de)反(fan)應體系置于儀器的(de)樣品(pin)孔中(zhong),設置好擴增程序(xu)(包括變性(xing)、退火、延伸(shen)的(de)溫度(du)與時間(jian)參數(shu))和熒光采集方案。儀器運行(xing)期間(jian)無需人工干預,自動(dong)完成所有循環并(bing)記錄數(shu)據(ju)。運行(xing)結束后(hou),用(yong)戶可通過(guo)軟件立即查看擴增曲線和定量結果。


因此(ci),熒光(guang)定量PCR儀器憑(ping)借其實(shi)時、定量、高特異性(xing)和高靈(ling)敏度(du)的技術(shu)(shu)優勢,已成為(wei)現代分子生物學(xue)實(shi)驗(yan)室、臨床(chuang)檢驗(yan)中心及疾病預防控制機構不可或缺的標準設備。它推動了(le)核酸檢測從定性(xing)到定量的跨越,為(wei)精準醫療(liao)、疾病防控和前沿生命科(ke)學(xue)研究提供了(le)強有(you)力的技術(shu)(shu)支(zhi)撐(cheng)。

熒光定量PCR儀器高精度實現核酸實時定量

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